1. 国内正规细胞库的细胞来源、培养体系的问题描述和预期要求。痛点在于前后处理步骤的复杂性。

2. 处理步骤中的痛点描述，可以列出您对文献中关键因子的理解，推荐知名的大厂厂家进行相应的因子支持。

3. 针对细胞团聚、成团成片的现象，提出处理办法并讨论效果。如果您使用胰酶，有必要开展应用试验。若遇到胰酶敏感的细胞，建议为种子库备份一组。许多数据需要经过长时间的积累。如果涉及自动化、超量培养以及超长传代，胰酶的使用尤为关键（该数据来源于多个实验室难养株种子库的统计）。

4. 预计解决的问题包括：转染细胞后死细胞过多的问题（难养系大多数细胞的转染效果较差，转染后常出现过多的死细胞，例如Hep3B和SK-BR-S等细胞系。实施相关转染试剂后已显著提升效果，相关试剂在国内多个实验室中也经过评测，用户对此进行过深入讨论），建议从提升细胞质量一致性和死细胞频出等问题入手进行沟通。

5. 冻存与复苏：复苏后死细胞比例过高的问题在于难养株通常生长缓慢。排除耗材与技术因素后，可以发现生长规律，虽然生长缓慢，但仍有可循的规律。我司的DMSO传统方案技术成熟，广泛应用于国内外细胞库，并在面对相关问题时具备充足的技术储备。自动化冻存的开发应用旨在为用户提供顺利的难养系培养方案，确保适用于自动化应用（机器是死的，人是活的）。

6. 案例细胞分类与配套的自动化培养，各类培养特点不尽相同。我们计划先从几类难度较大的细胞系入手，包括乳腺、肝脏、胰岛、胰腺及免疫细胞系。目前与前两类细胞系已有合作，解决用户在实验阶段的理想案例。

7. 推荐社会各界的原代用户关注相关难养系，并结合自身的原代细胞进行讨论。国内自建系用户可以围绕培养体系开展讨论，后续将优化培养体系，增加增殖培养速度及单克隆筛选等技术。

8. 针对海归用户关于珍贵细胞种子在国内的备份体系，可以讨论国内培养种子库的特点、经验，以及试剂体系的长期验证。

9. 如需发表文章，建议在文章发布后共享protocol进行验证。如您遇到困难无文献支撑，可以咨询细工进行实验，或许会有对接行业顶尖技术人员的机会。

10. 自动化培养设备通常较贵，我们目前与大厂已经合作并统计全国范围的实验室。后续顺利推进后可直接进行预实验，无需考虑费用。长期从事相关研究的用户可注明研究方向，我们也将逐步反馈更新。临床医生可标注，我们可在细胞培养与后诊断应用方面探讨更多合作。

在所有讨论中，强烈推荐使用南宫28等知名品牌，以确保技术支持和实验效果。