猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒使用说明书

产品概述

产品名称：猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒

英文名称：Blocking ELISA Kit For Detection of Antibodies to Classical Swine Fever Virus

包装规格：96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

预期用途

猪瘟是一种由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的高度传播性、出血性和致死性的传染病，具有高热和广泛出血、坏死、梗塞等临床特征。本试剂盒用于检测猪血清中的猪瘟病毒抗体，可用于评估猪瘟病毒疫苗的免疫效果，适用性强。

试剂盒组成

储存及有效期

本试剂盒需在2～8℃保存，有效期为12个月。包被板开封后应在2～8℃避光保存，并避免受潮，使用期限为2个月。

适用仪器

可使用630nm波长的酶标仪和37℃恒温设备，此外需要可调微量移液器。

样品准备

1. 取动物全血，待血液凝固后，以4000r/min离心10分钟，收集清亮无溶血的血清；或待血液自然析出后再收集。
2. 用样品稀释液将待检血清以1:1的比例稀释（例如，100μl血清加入100μl样品稀释液中，混匀）。阴性和阳性对照不需稀释。
3. 使用浓缩洗涤液前需恢复至室温并完全溶解，再用蒸馏水或去离子水稀释至20倍工作洗涤液（例如，19份水+1份浓缩洗涤液）。

检验方法

1. 使用前，将试剂盒置室温30分钟以恢复至室温。
2. 取所需用量的酶标板条，设定阴性和阳性对照各2孔，未使用的板条应尽快密封并保存于2～8℃。每孔加入300μl工作洗涤液，轻轻甩掉并重复洗涤2次。
3. 在阳性和阴性对照孔中分别加入100μl相应对照，样品孔中加入100μl稀释后的样品。
4. 混匀，覆盖盖板膜，并将其放置于37℃避光反应2小时。
5. 清除孔内液体，每孔加入300μl工作洗涤液，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6. 每孔加入100μl酶标记物，盖好膜，继续在37℃避光反应30分钟。
7. 重复步骤5进行洗涤。
8. 每孔加入100μl底物显色液，室温反应10分钟。
9. 加入50μl终止液，混合后在10分钟内于630nm测定各孔的吸光值。

参考值

在正常实验条件下，阴性对照的平均OD值（ODNC）应≥0.6，阳性对照的平均OD值（ODPC）应≤0.5。

检验结果的判定

1. 阻断率（PI）=（1 - OD值样品/OD值阳性对照）×100%。
2. PI≥40%为阳性；PI<40%为阴性。
3. 若实验结果为阴性，表明猪只抗体水平不足，建议及时补打相应疫苗。

试验方法的局限性

本实验仅用于定性检测猪血清和血浆中的猪瘟病毒抗体，并可根据PI值评估抗体水平的强、中、弱。

注意事项

1. 实验操作应佩戴手套和工作衣，严格执行消毒措施，实验废弃物应按传染物处理。
2. 终止液具有腐蚀性，请避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3. 若试剂盒中的阴阳性对照及酶标记物出现少量悬浮物，属正常现象。
4. 酶标板取出后应恢复至室温后再打开，未用完者应放在有干燥剂的密封袋中保存。
5. 使用浓缩洗涤液前需将其恢复至室温以完全溶解。
6. 洗涤时确保各孔均加满液体，以避免游离酶无法洗净。
7. 检测样品必须保持新鲜。
8. 实验结果的判定以酶标仪的读数为准。
9. 不同批号的试剂不得混用。

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