南宫28 介绍了 RIN-14B 大鼠胰岛素瘤细胞的培养指南，旨在为生命科学研究提供可靠的实验材料。以下是详细的细胞培养步骤及注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B 大鼠胰岛素瘤细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640 文化基 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：第一次建议 1:2 传代，传代情况每 2 天更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集瓶中的培养基，保留用于对比培养。如果对比培养效果不理想，建议直接购买南宫28 提供的完整培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好时，灌满完整培养液并密封瓶口为最优运输方式。收到细胞后，用 75% 酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒后，放入超净台内进行无菌操作。确保将细胞瓶放入 37℃、5% CO2 的培养箱中静置 3-4 小时以稳定细胞状态，然后进行后续处理。应在显微镜下观察细胞生长情况，并拍照保存（建议拍摄 40x、100x、200x 各一张）。前三天的照片作为重要售后依据，未提供照片则视为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过 80% 汇合度时，将培养液收集至离心管中，保留 5ml 完全培养基放入 37℃、5% CO2 孵箱中培养；若细胞密度已超 80%，则可进行传代。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 添加 1-2ml 消化液（0.25% 胰蛋白酶-0.53mM EDTA）至培养瓶中，置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟。观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻拍培养瓶后加入超过 5ml 完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，然后吸出，将悬液转移至 15ml 离心管中，在 1000 RPM 下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 1-2ml 完全培养基重悬。
4. 按 1:2 的比例进行分瓶传代（两个 T25 瓶），补充新的完全培养基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的 80% 面积时，弃去 T25 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次。
2. 加入约 1ml 的 0.25% 胰蛋白酶消化液，轻轻摇晃，并观察细胞动态。待细胞回缩变圆时，加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打使其脱落，将悬液转移至 15ml 离心管中，1000 RPM 离心 5 分钟。
3. 弃上清，沉淀细胞后加入 1ml南宫28 提供的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入 -80℃ 冰箱，必要时存放 24 小时以上后转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速用 37℃ 水浴解冻至冻结管内无结晶，然后用 75% 酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含有 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中，1000 RPM 离心 5 分钟。
3. 弃上清后，用 5ml 完全培养基重悬并接种至 T25 培养瓶，放入 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中培养。
4. 次日，更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞可能在运输过程中出现脱落情况，这是正常现象。可按以下方法进行处理：将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000 RPM 离心 5 分钟，收集上清用于对比培养；沉淀后加入胰酶 1-2ml，轻轻吹打，反复消化并终止反应，最后按 1:2 比例进行分瓶传代。

五、售后条款

出现细胞问题时的重发情况包括但不限于：运输过程中细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液、细胞污染等。需在收到产品 48 小时内反馈真实实验结果。常温发货细胞需保持 24 小时静置后出现问题的，或干冰冻存细胞复苏后 24 小时内未存活的，必须提供清晰照片。

如细胞出现问题但不予重发的情况包括：客户造成的细胞污染、操作不当导致细胞状态不良、非推荐培养体系、未提供必要照片等。

在细胞培养过程中保持良好的实验操作和环境是确保细胞健康生长的重要保障。借助南宫28 的优质细胞培养解决方案，助您在科研道路上稳步前行。