检测原理

南宫28的2D荧光细胞活力检测法（2DLuminescent Cell Viability Assay）利用ATP依赖的荧光素酶催化反应，以化学发光信号测定细胞内ATP含量，从而评估细胞活力或量化活细胞数量。该方法检测范围广、灵敏度高且稳定性好。在96孔板中，100至100,000个细胞范围内存在良好的线性关系，尽管不同细胞的检测数量上限可能不同。此外，该方法操作简便，试剂盒内的检测试剂即用，且读取结果稳定、检测快捷，完成检测仅需约10分钟，无需对细胞进行洗涤或更换培养液。相较于其他常见的细胞活力检测方法，如Calcein-AT、CCK-8等，南宫28的2D荧光细胞活力检测法更为快速便利。

产品优势

南宫28的2D荧光细胞活力检测法（abs50065）具备高灵敏度和宽线性范围，可适用于少量样品及大量样品的高通量筛选：

1. 方便快速：试剂盒内的检测试剂即用，读取稳定，检测速度快，约10分钟即可完成检测。
2. 灵敏度高：可检测最低10nmol的ATP。
3. 线性范围宽：在96孔板中，良好的线性关系适用于100至100,000个细胞范围，但不同细胞的数量上限可能不同。
4. 高通量：兼容少量以及大量样品的高通量筛选。

使用方法

一、试剂准备

南宫28的试剂需在实验前一天置于4℃过夜融化，或者实验当天在室温融化，也可在22℃水浴融化，注意水温不超过25℃。若试剂未在室温条件下融化，请在使用前将其放置于22℃水浴以确保平衡。对于5mL的试剂，融化需约10分钟；50mL需约20分钟。使用前轻柔颠倒5次使溶液混匀。添加Triton X-100（abs9149），使其终浓度为0.2%。

二、检测步骤

1. **细胞培养**：使用适合化学发光检测的96孔板（abs7149），每孔接种100μL细胞（根据培养时间确定初始细胞密度，检测时每孔细胞数量不应超过10万个），并设置不含细胞的培养基作为阴性对照。可设定细胞浓度梯度以获得最佳实验结果，在37℃、CO2浓度为5%的条件下培养细胞，并根据需要进行药物处理。

2. **ATP标准曲线的制作**（可选）：将制备的ATP标准溶液用PBS稀释成适当浓度梯度，于96孔板中每孔加入100μL的标准品。

3. **细胞活力检测**：

1. 融解冻存的发光法检测试剂并平衡至室温（或22℃恒温水浴平衡），取出实验用体积的检测试剂，添加Triton X-100至0.2%终浓度；
2. 取出细胞培养板，室温平衡10分钟（或22℃恒温平衡，尽量控制在30分钟以内）；
3. 每孔加入100μL检测试剂（避免在边缘孔添加，以免造成发光信号不稳定）；
4. 室温振荡2分钟，促进细胞裂解；
5. 室温静置10分钟，使发光信号趋于稳定；
6. 使用多功能酶标仪进行化学发光检测，根据仪器要求设置相应参数，每孔检测时间一般为0.25-1秒；
7. 依据化学发光读数计算细胞的相对活力，或通过ATP标准曲线计算ATP含量以得出细胞的相对活力。

三、注意事项

1. **温度**：荧光素酶对温度敏感，反复冻融会影响其活性。建议分装后在-20℃避光保存，试剂及细胞样品应平衡至室温，以避免影响酶催化效果。

2. **化学因素**：荧光素酶的反应速率和发光强度受化学环境影响，不同类型的培养基和血清对发光强度和衰减速率存在差异。高药物含量可能干扰荧光素酶反应，建议设立对照孔以排除干扰。

3. **光敏感**：试剂对光敏感，需避光保存，转移试剂需确保避光。

4. **ATP污染**：操作时佩戴口罩和手套，避免接触污染表面，减少对试剂的多次插入操作。

以上是有关南宫28的2D荧光细胞活力检测法的详细介绍，如有细胞实验相关问题，欢迎进行交流！