南宫28所提供的TurboTEV蛋白酶是经过增强形式改良的烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白催化片段，属于半胱氨酸蛋白酶。它可以精准识别并切割位于Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly序列中的切割位点，特别是在Gln和Gly之间。此蛋白酶的特性包括：在4°C下保持高活性，且具备卓越的特异性和稳定性。TurboTEV蛋白酶的活性无需依赖任何特定的缓冲液，因此能够与最适合目标蛋白的缓冲液搭配使用。

TurboTEV蛋白酶的分子量为52kDa，并携带GST和His标签，使其能够通过Ni螯合或谷胱甘肽（GSH）树脂轻松去除标签。

一、来源及活性

来源于大肠杆菌，其活性超过10单位/µg。在30°C的条件下，1单位的TurboTEV蛋白酶可在1小时内裂解3µg对照底物的85%。

二、操作步骤

1. 裂解步骤
   1. 准备新鲜的冷透析缓冲液，例如：25mM Tris-HCl，pH 8.0，150-500mM NaCl，14mM β-巯基乙醇。
   2. 将目标蛋白样品池用透析缓冲液稀释至1-2 mg/mL。注意：若目标蛋白在透析缓冲液中出现聚集，可选择不进行此步骤。
   3. 留出少量未切割的样品以作后续分析。如目标蛋白样品是由镍柱洗脱而来，并且与EDTA兼容，可加入EDTA以达到最终浓度0.5mM。
   4. 按照1:100（w/w）的比例加入TurboTEV蛋白酶，即每100mg目标蛋白应添加10000单位（1mg）TurboTEV蛋白酶。
   5. 在4°C条件下，使用透析缓冲液透析过夜（约16小时）。
2. 去除TurboTEV蛋白酶
   1. 上柱处理。
   2. 进行SDS-PAGE分析（可选）。

三、产品应用

• 实现蛋白裂解功能。
• 去除重组蛋白中的融合标签。
• 用于蛋白质和肽的纯化。

四、常见问题回答

1. 问：在TEV消化反应中，25mM Tris-HCl，pH 8.0，150mM NaCl和14mM β-巯基乙醇的缓冲条件有多重要？是否有任何成分会对TurboTEV的剪切效率产生负面影响？
   • 答：(a) 1mM DTT可接受；(b) 不建议使用10%甘油；(c) 不推荐20mM组氨酸；(d) 不宜使用500mM NaCl；(e) 不推荐100mM Tris；(f) β-巯基乙醇可以替代DTT。
2. 问：在剪切之前，是否需要对蛋白质进行缓冲液交换？
   • 答：这可能是必要的。

通过南宫28，我们的TurboTEV蛋白酶为生物医学研究提供了重要的工具，不仅能增强实验的可靠性和效率，还适用于多种应用场景，助力科研工作者在生物研究中取得突破性进展。