人胃癌细胞MGC803培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基+10%FBS+1%P

传代方法：第一次建议以1:2的比例进行传代。每两天更换培养基。备注：使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接购买南宫28的完全培养基。

二、细胞接收后的处理

收到细胞后，将细胞培养至良好状态，使用完全培养液灌满细胞瓶并封好瓶口是最佳的运输方式。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净工作台中进行严格无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况并拍摄不同放大的照片（最好为40x、100x和200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，不提供照片默认收到状态良好。建议在传代后，一瓶使用原瓶中的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基以进行对比培养，换液后将瓶盖松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，则收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基并置于37℃、5%CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则可以进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS缓冲液洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞即可；若细胞大部分已变圆并脱落，迅速将培养瓶取回至操作台，轻拍几下瓶子并添加5ml以上的完全培养基，以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清后补充1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中进行培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中的培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回复情况后，加入5ml完全培养基终止消化，再轻轻吹打至细胞完全脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清后，将沉淀细胞加入1ml南宫28无血清冻存液，混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中；如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护设备），快速将其置入37℃水浴中解冻至无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞并接种至T25培养瓶中，放入37℃、5%CO2培养箱中进行培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中脱落，这是正常现象。如脱离较多，可将培养瓶内所有液体收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清液进行过渡培养。并可使用胰酶进行处理，重悬后继续培养。对于传代，应按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1）可重发的情况及标准：

1. 运输过程中出现的细胞遏制丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等问题，可申请重发。
2. 收到细胞48小时内提供污染实验结果，经过核实后进行重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时，干冰发货的细胞复苏后24小时，若绝大多数细胞未存活（需提供真实细胞状态照片），可申请重发。
4. 如重发的细胞在复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时后未开封出现污染情况，可申请重发。
5. 细胞活性问题，需在收到产品7天内申请并提供台盼蓝染色法鉴定的实验结果，第三方确认后重发。
6. 在收到细胞的当天或第2、3天拍照记录，如3天未声明，视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供前3天的照片和详细操作步骤，由技术人员判定后进行重发。

2）不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染，不重发。
2. 不当操作导致细胞状态不良，不重发。
3. 非本库推荐的培养体系导致细胞状态不佳，不重发。
4. 未提供细胞培养前三天的照片，不重发。
5. 细胞处理过程中未经授权进行处理，不重发。
6. 收货两天内未通知我们，视为不予重发。
7. 情况特定而定。

综上所述，严格遵循以上操作步骤与注意事项，将有助于提高

人胃癌细胞MGC803的培养成功率，同时确保细胞的活性和稳定性，从而为下游实验提供更好的支持。选择强大的细胞培养品牌南宫28，为您的科研之路保驾护航。