大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

生长特性：贴壁悬浮混合生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S

传代方法：建议第一次1:2传代，替换培养液情况为每两天进行一次。

备注：悬浮细胞需通过离心收集，贴壁细胞按贴壁方法处理。使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡培养。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应确保处于良好状态。首先，灌满完全培养液并封好瓶口，这样可以有效保护运输过程中的细胞。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒后，放置于超净工作台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中，静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议拍摄40x、100x、200x各一张），前三天的照片可作为重要的售后依据，若未提供照片则默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当汇合度未超过80%时，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保存5ml完全培养基，在37℃、5% CO2孵箱中进行培养。如细胞密度超过80%，可进行传代培养：

1. 贴壁细胞：
   1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
   2. 加入0.25%的胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，若大部分细胞变圆并脱落，则迅速轻轻敲打培养瓶，加5ml以上完全培养基以终止消化。
   3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，然后添加1-2ml完全培养基重悬。
   4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代至两个T25瓶中，补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2培养箱继续培养。
2. 悬浮细胞：
   1. 收集细胞，在1000 RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，添加1-2ml培养液后吹匀，然后按1:2比例分至新的含8ml完全培养基的新瓶中。
   2. 另一种方法为半数换液，在弃去一半培养基后，将剩余细胞悬起，按1:2比例分至新的含8ml完全培养基的新瓶中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖T25培养瓶的80%面积时，弃去培养液，使用PBS清洗细胞一次；

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中并进行1000 RPM离心5分钟；

3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中；

4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶出现，随后使用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000 RPM离心5分钟；

3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，将其接种至T25培养瓶中，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养，第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会脱落，属于正常现象。如果细胞脱落较多，可以收集培养瓶中的培养液于离心管中，以1000 RPM离心5分钟，然后弃去上清作过渡培养，随后加入胰蛋白酶进行处理。

五、售后条款

1. 针对细胞出现的问题，我们提供重发的情况与判定标准；如细胞在运输过程中出现问题、污染等，需在规定时间内提供实验结果与照片以便核实；

2. 某些情况下如客户造成的污染或操作不当，我们将不进行重发。具体条款视情况而定。

如需进一步了解或获取更多信息，请访问南宫28的官方网站。